禽腺病毒I群血清4型卵黄抗体研发

1.     病毒分离鉴定
采自临沂发生的、主要病理变化为心包积液、肝肿大的肉鸡肝脏，按肝脏：生理盐水=1:5（W/V）匀浆，离心取上清，过滤除菌，无菌检验合格，用肉鸡雏传代获得。PCR检测FAdV-4 阳性（目标片段大小954bp，图1），纯化DNA测序（图2），与Genbank上禽腺病毒基因同源性比对（图3），进化树分析（图4）。确诊病原为禽腺病毒I群血清4型。

图 1

图 2

图 3

图 4

2.     卵黄抗体制备
FAdV-4抗原灭活，制备铝胶灭活疫苗和油乳剂灭活疫苗按一定的免疫程序接种商品蛋鸡，收集高免鸡蛋，提取抗体，中和抗体效价为1:286（雏鸡中和试验法），SDS-PAGE法检测纯度（图5）。

图 5

3.     预防保护试验
20日龄健康雏鸡，随机分为4组。其中，攻毒对照10只，抗体1组5只，抗体2组5只，空白对照5只。各组分别隔离饲养。抗体1组和2组分别皮下注射接种FAdV-4卵黄抗体各0.5ml/只和0.8ml/只，接种抗体后24小时，对抗体1组、抗体2组和攻毒对照组鸡分别腿肌内注射FAdV-4各0.3ml（100LD50含）/只，攻毒后观察7日。
4.     结果观察（整个观察期内，空白对照组鸡均正常，故未参与照片比对）
4.1攻毒后1日
攻毒对照组雏鸡精神沉郁，羽毛逆立，呼吸急促，采食下降；接种抗体组雏鸡精神状态正常、活泼（图6）。

图 6

4.2攻毒后2日
攻毒对照组死亡5只（图7），剖检症状均为心包积液，呈淡黄色，液量
最多为2.5ml，肝脏肿大（图8），存活的5只精神沉郁，趴伏，拉绿色稀便（图9）；接种抗体组均健活，精神活泼（图7），粪便正常（图9）。

图 7

图 8

图 9

4.3 攻毒后3日
攻毒对照组死亡4只，心包积液愈加明显或被吸收呈胶冻状（图10），肺脏水肿、肾脏输尿管有尿酸盐沉积、法氏囊肿大（图11）。接种抗体组均健活（图12）。

图 10

图 11

图 12

4.4 攻毒后4-6日
攻毒对照组存活1只；接种抗体组均健活（图13）。

图 13

4.5 攻毒后7日
攻毒对照组死亡1只，肝脏肿大、心肌变性坏死、脾脏肿大（图14）；接种抗体组均健活（图15），随机扑杀一只，主要脏器组织均无异常（图16）。

图 15

图 16

5.    结论
    中和抗体效价≥1:286的禽腺病毒I群血清4型卵黄抗体接种0.5-0.8ml/只，可有效预防鸡安卡拉病。